抗體的鑒定

對制備的McAb進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的，應(yīng)做下述幾個(gè)方面的鑒定：

1．抗體特異性的鑒定 　　

除用免疫原（抗原）進(jìn)行抗體的檢測外，還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進(jìn)行交叉試驗(yàn)，方法可用ELISA、IFA法。例如：①制備抗黑色素瘤細(xì)胞的McAb，除用黑色素瘤細(xì)胞反應(yīng)外，還應(yīng)該用其它臟器的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng)，以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。②制備抗重組的細(xì)胞因子的單克隆抗體，應(yīng)首先考慮是否與表達(dá)菌株的蛋白有交叉反應(yīng)，其次是與其它細(xì)胞因子間有無交叉。

2．McAb的Ig類與亞類的鑒定　　

一般在用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的第二抗體進(jìn)行篩選時(shí)已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的兔抗鼠IgG或IgM，則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標(biāo)準(zhǔn)抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴(kuò)或夾心ELISA來確定。在作雙擴(kuò)試驗(yàn)時(shí)，如加入適量的PEG（3%），更有利于沉淀線的形成。

3．McAb中和活性的鑒定 　　　

用動物或細(xì)胞的保護(hù)實(shí)驗(yàn)來確定McAb的生物學(xué)活性。例如，如果確定抗病毒McAb的中和活性，則可用抗體和病毒同時(shí)接種于易感的動物或敏感的細(xì)胞，來觀察動物或細(xì)胞是否得到抗體的保護(hù)。

4．McAb識別抗原表位的鑒定　　

用競爭結(jié)合試驗(yàn)，測相加指數(shù)的方法，測定McAb所識別抗原位點(diǎn)，來確定McAb的識別的表位是否相同。

5．McAb親合力的鑒定　

用ELISA或RIA競爭結(jié)合試驗(yàn)來確定McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合的親合力。

多克隆抗體的制備一般包括以下幾個(gè)步驟： 

1、制備抗原。 　

2、選擇實(shí)驗(yàn)動物。 

3、動物免疫。 　

4、試取血進(jìn)行測試，看看是否成功免疫。

5、如果成功免疫，殺死實(shí)驗(yàn)動物，采集全部血清。

6、純化出抗體。 　

7、鑒定抗體。包括純度以及特異性。