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細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟點(diǎn)擊次數(shù):10977 更新時(shí)間:2011-07-19

                                         細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟

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1. 細(xì)胞一定要貼在玻片上(可以放入24孔板),為后面照像打基礎(chǔ)。細(xì)胞密度適中,大約60-75%滿片即可,否則容易脫片。

2. 取出細(xì)胞后用4%多聚甲醛固定15分鐘,現(xiàn)用現(xiàn)配。(以下各步驟切毋使玻片干燥)

3. PBS沖洗

4. 0.1%Triton作用20分鐘

5. PBS沖洗
 
6. 10%正常血清封閉10分鐘

7. 加入一抗,4度孵育過(guò)夜(找個(gè)小瓶蓋將小玻片支起來(lái),抗體就不容易溢出),還要記住“砸片”,就是抗體從較高處落到片子上,以分布均勻??贵w稀釋度1:60,較常用!

8. PBS沖洗4次,各5分鐘

9加入熒光二抗,室溫30分鐘??贵w稀釋度1:400,較常用!

10.  同8。

11. 90%甘油封片。也很關(guān)鍵阿,多封幾次才有體會(huì)。

12. 避光保存,或到顯微鏡下觀察。
 
 
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